新闻风向标细胞粘附验（显微镜直接计数）

addle

简介动物红细胞的相关知识也可以到网站具体了解一下，有专业的客服人员为您全面解读，相信会有一个好的合作！https://www.hqzjbio.com/products

细胞粘附性是维持组织结构稳定的基本条件，也是细胞运动和发挥功能的调节因素，通常分细胞与细胞粘附和细胞与基质粘附。

原理
机体内许多细胞，如上皮细胞固定在某处发挥功能；另一些细胞，如白细胞，活跃运动，就需要不断调节细胞粘附。细胞粘附性的改变在肿瘤转移过程中也发挥着重要作用。恶性肿瘤具有从原发瘤分离及在体内扩散的能力，提示这些细胞相互识别及粘附机制发生了改变。

用途
药物验、基因转染、敲除或培养，肿瘤转移机制

材料与仪器
步骤
1、将45×105个细胞每孔104左右传代于菌6孔培养板中。
2、培养24h后，用LipofectamineTM2000将37LRPsiRNA转染细胞中，转染后的细胞置37℃、5％CO2培养箱中培养，48h后收集细胞。同时各有两个平行孔的细胞进行阴性对照转染及未转染。转染终浓度即siRNA终浓度为100nmolL。?
3、培养48h后收集细胞，用025%胰酶将贴壁培养细胞（约1×106个）从壁上消化下来并制成单细胞悬液。?
4、用血清MEM培养基将Matrigel配制成10μg250μl（1:300）的人工基底膜胶备用。
5、96孔板每孔中铺Matrigel2μg50μl，放于超净台中风干过夜。?
6、96孔板每孔加入适量血清MEM细胞培养液（或PBS或生理盐水），放置60－90min，洗去多余的胶。
7、取转染、阴性对照转染及未转染细胞以4×103孔接种在铺胶的96孔板中，设3个重复孔，放入37℃、5％CO2培养箱中分别培养20min、40min、60min。?
8、在相应时间点取出96孔板，吸出培养液，用PBS洗3遍，洗去未粘附细胞。
9、每孔加入100μl甲醇，固定15min。
10、每孔加入100μl姬姆萨染液，染色15min，蒸馏水洗去染液。
11、显微镜下计数粘附细胞数量（每孔在固定位置取8个视野）。

注意事项
1、细胞处理需要小心操作，尽量避免人为的损伤细胞。重悬细胞是动作要轻柔，避免多次反复的激烈吹打；
2、染色培养时间根据细胞种类的不同和每孔内细胞数量的多少而异；
3、染色程度要根据细胞种类而定；
4、加染液时注意尽量不要产生气泡。


来源：丁香验